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    腹瀉性貝類毒素試劑盒不同分類及相關(guān)原理分析

    發(fā)布時(shí)間: 2021-05-20  點(diǎn)擊次數(shù): 1161次
      腹瀉性貝類毒素試劑盒的原理是酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法,用于水及水產(chǎn)品中腹瀉性貝類毒素的定量測(cè)定。岡田酸是腹瀉性貝類毒素的一種。對(duì)于水產(chǎn)品需要做前處理,不可以直接檢測(cè)。如果需要的話陽(yáng)性樣品可以通過(guò)HPLC和GC/MS來(lái)驗(yàn)證。
     
      試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)溶液里含有少量的岡田酸。底物中包含有四甲基聯(lián)苯胺,終止液中含有稀硫酸。要避免皮膚和粘膜與終止液接觸,如果不小心接觸了請(qǐng)馬上用水沖洗。試劑盒應(yīng)保存在2-8℃,不要冷凍。在使用之前要把試劑盒中的溶液回復(fù)到室溫(20-25℃)。有效期內(nèi)試劑盒中的試劑都可以使用。
     
      腹瀉性貝類毒素試劑盒實(shí)驗(yàn)原理:
     
      本試劑盒采用直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,在酶標(biāo)板微孔上預(yù)包被二抗,將與軟海綿酸酶標(biāo)結(jié)合物競(jìng)爭(zhēng)溶液中專屬抗體提供的吸附位點(diǎn)。然后,軟海綿酸-抗體將與固載于微孔板的第二抗體(山羊抗兔抗體)結(jié)合。沖洗掉微孔板上未結(jié)合的物質(zhì)。經(jīng)TMB 底物顯色,樣本吸光度值與其殘留物呈負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較再乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù),即可得出樣本中軟海綿酸的含量。
     
      腹瀉性貝類毒素試劑盒的分類:
     
      1、間接法測(cè)抗體
     
      間接法是檢測(cè)抗體常用的方法。其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體(抗人免疫球蛋白抗體)以檢測(cè)與固相抗原結(jié)合的受檢抗體,故稱為間接法。
     
      2、雙抗原夾心法測(cè)抗體
     
      反應(yīng)模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物,以檢測(cè)相應(yīng)的抗體。與間接法測(cè)抗體的不同之處為以酶標(biāo)抗原代替酶標(biāo)抗抗體。此法中受檢標(biāo)本不需稀釋,可直接用于測(cè)定,因此其敏感度相對(duì)高于間接法。乙肝標(biāo)志物中抗HBs的檢測(cè)常采用本法。本法關(guān)鍵在于酶標(biāo)抗原的制備,應(yīng)根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的不同,尋找合適的標(biāo)記方法。
     
      3、雙抗體夾心法測(cè)抗原
     
      雙抗體夾心法是檢測(cè)抗原常用的方法,操作步驟如下:
     
      1)將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié),形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。
     
      2)加受檢標(biāo)本,保溫反應(yīng)。標(biāo)本中的抗原與固相抗體結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。
     
      3)加酶標(biāo)抗體,保溫反應(yīng)。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢抗原的量相關(guān)。
     
      4)加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。通過(guò)比色,測(cè)知標(biāo)本中抗原的量。
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